Определение плоидности клеток при раке

Методика компьютерной плоидометрии клеток в дифференциальной диагностике стадий озлокачествления тканей.

Исследуемый материал: биоптат легкого
Метод окраски: по Фельгену

Пример №1: Анализ произведен при помощи программного обеспечения АргусСофт. Оценка результатов проведена с использованием метода оценки стадии канцерогенеза. Материалы предоставлены проф.Новик В.И. (лаборатория цитологии НИИ онкологии им.Петрова г.СПб).

Возрастающие требования к точности диагностики стадий озлокачествления тканей, связаны с новыми возможностями лечения разных раковых опухолей. Особенно важна дифференциальная диагностика доброкачественных и злокачественных новообразований.

Эти трудности морфологической диагностики связаны с методами забора материала для исследования, его представительностью патологическому процессу, способами фиксации материала и методами их окраски, а также с большой долей субъективизма исследователя в оценке выраженности гистологических и цитологических изменений.  Использование обобщенных плоидометрических показателей уточняет диагнозы стадий развития новообразований почти на 10%. Этот процесс развития новообразований назван законом ступенчатой стадийности канцерогенеза.

Каждому состоянию клетки соответствует определённое количество ДНК, рассчитывающееся компьютером в единицах плоидности (с) по оптической плотности клеточных ядер (индекс накопления ДНК — ИНДНК). Стандартной единицей плоидности является оптическая плотность ядра лимфоцита этой же ткани.

onko1 onko2
onko4

Измерения параметров лимфоцитов проводят для каждой партии окраски. Если в препаратах нет лимфоцитов, одновременно с изучаемыми клетками окрашивают препараты, содержащие нормальные малые лимфоциты. Выделяют малые лимфоциты, определяют их интегральную оптическую плотность и вычисляют среднюю из всей выборки. Это и есть диплоидность лимфоцитов (2С). Гаплоидный набор ДНК равен 1С. Затем  выделяют изучаемые клетки,  измеряют их интегральную оптическую плотность и определяют единицы плоидности. Интегральная оптическая плотность клетки при этом делится на гаплоидный стандарт.

Скачать проспект «Методика компьютерной плоидометрии клеток в дифференциальной диагностике стадий озлокачествления тканей».Oncology booklet

Пример №2:  Методика разработана на основе открытия академика Г. Г. Автандилова. Материалы предоставлены к.м.н.Григорьевой С.Г. (кафедра патанатомии РМАПО г.Москва).

«Гистологический стандарт плоидности» получают определяя средние значения интегральной яркости (оптической плотности) ядер малых лимфоцитов в гистологическом срезе толщиной 8 мкм или в паракорти- кальной зоне подсаженного в блок кусочка лимфатического узла. Модальный класс измерений интеграль- ной яркости целых ядер малых лимфоцитов и их фрагментов принимают соответствующим диплоидному набору хромосом – 2 с. Половина этого показателя становится единицей измерения (1с) плоидности ядер клеток гистологического среза.

В гистологических срезах плоидность ядра исследуемой клетки именуется на основе следующего правила: если полученное числовой показатель лежит в интервале 1,5 — 2,4 с — ядра считаются парадиплоидным (2 с) , 2,5 — 3,4с – паратриплоидными (3 с) , 3,5 — 4,4с – паратетраплоидным (4 с), 4,5 — 5,4с – парапентаплоидными (5 с).

onko5 onko6

Наличие  преобладания  в   гистограмме  парадиплоидных  ядер (1,5 с – 2,5 с), свидетельствует о нормаль- ной  физиологической  регенерации эпителиальных клеток. Причем, ядра, имеющие среднюю плоидность ниже  1,5 с, позволяют  относить соответствующие  клетки  к  числу  апоптозных,   а   в гистологических срезах и –   к   фрагментам  ядер  клеток. Преобладание   ядер с  плоидностью  2,5 с –2,9 с   – характеризует процесс   гиперплазии, легкую  дисплазию  и  доброкачественные опухоли.